うまくなったもんだ

久々のクローニング。某後輩が作ってくれたベクターに、こっちで用意したインサートを放り込むだけの簡単なモノやけど、クローニングの経験はまだまだ浅いからねぇ(~~;)

先週、ベクターとインサートを用意。制限酵素サイトの関係で、ベクターはBglII消化→Klenowでblunting→BamHI消化→ゲル抽出。bluntingがうまくいってるかどうか若干不安を残しつつ(~~;)NruIとBamHIで消化→ゲル抽出してきたインサートとライゲーション→週末にけいしつてんかん。

月曜の朝。プレートにはアホほどコロニーが生えてました。

インサート無しのはずのネガコンも(;￣▽￣)

ベクター：インサート＝1：3にしたプレートでちょっとコロニーが多い気がしたので、試しに20コほど培養してみました。

手取りで20コは久しぶり。集菌から制限酵素処理に入るまでがちょうど2時間。プラスミド取るのも早くなったもんだ。英会話から帰って来て、泳動してチェック。

インサート1.6kbキターーーーー(°∀°)ーーーーーッ！！

20のうち、3クローンがモノを持ってました。効率がいいとは言いがたいが、まぁ取れたからOKでしょう。

ほかの仕事との兼ね合いで週に一操作くらいできてたので、正味としては時間がかかってますが、今回は実質1週間くらいでリクローニングが完了しました。5年ほど前まではTaqで増やしたPCR断片をTベクターへクローニングするのすら一苦労していたもんだが（苦笑）いろんな人にいろんなコトを教わって、ここまでこれました。みなさんに感謝(￣人￣)

来週はくらみに形質転換っすー。